人靠衣装马靠鞍,细胞实验靠规范

细胞生物学专家2020年7月31日
 
细胞实验环节中,细胞培养环境至关重要。之前我们已经介绍过鱼骨图,熟悉了影响细胞实验的微小环境。今天逍鹏生物为大家分享细胞实验室的相关规章制度,细胞实验室的使用方法和维护措施,确保细胞实验室得到正常运转,使工作人员熟悉操作并了解相关微生物类(含病毒、细菌等)的潜在危害,避免实验室工作者及实验室内部环境暴露于潜在危害性物质中,且能够在安全的环境下进行技术研发工作。
本次我们介绍生物实验室设备、安全操作规定、废弃物处理及实验室清洁等规定。


PART1  人员进出管制及物品进出管制

01  人员进出管制
▲ 操作人员示意图

细胞实验室主要由团队内相关实验研究人员使用,原则上不对外开放,其他人员如确实需使用细胞室,必须预先征得实验室负责人和该细胞室负责人同意。
1. 进出细胞室实验室需要严格登记。如有不符合实验室工作和生物安全要求的人员或样本,实验室负责人和细胞室工作人员有权责令整改。
2. 使用人员需参加专门的细胞培养室使用规范培训(无菌技术培训)并通过考核后,方可获准进入细胞实验室进行实验。严禁未经许可擅自进入细胞实验室或使用相关设备。
3. 为维持所有实验区、准备室压差值正常,以维持工作环境安全性,请进出时随手将门关紧,不同区域之间的门不可同时开启,以避免发生污染。

02 物品进出管制
所有进入细胞实验室的物品需经过传递窗,尽量经过紫外灯光照20min,使用酒精表面消毒。
严禁将可能含有污染物或病原菌的实验物品带入细胞室。细胞室内仅放置少量实验必需耗材即可,不得整箱搬入,出现洁净室内物品堆积状况。细胞室内储物柜的物品放置可由相关管理人员安排,并做标记。

PART2 细胞实验室设施介绍
▲ 实验室设备示意图

01 纯水系统

▲ 纯化水系统示意图

日常:保持设备及管路外观清洁,定期更换滤芯(1次/3个月)。纯化水系统短期停运期间,每三天需运转1~2小时,正常运行下每一个月进行一次巴氏消毒,遇到停机超过7天或纯化水微生物超标时也需进行巴氏消毒。
砂滤器应经常进行反冲洗,可安排在班前或班后,反冲洗水流量较大,但切记以不把滤料冲掉。若砂滤器反冲洗完,出水指标仍不能达到要求时,则应对活性器进行反冲洗,但应使反冲洗水流由小到大,以至不将炭粒冲走。
清洗箱的主要作用是主机的电导率达不到≤15us/m时,用来洗膜。为保持清洁,应定期进行清洗,在洗液时,必须先将水箱清洗干净,洗膜结束须将水箱中剩余酸排净,以备下次使用。
检查紫外线杀菌灯,使用时间达到该产品规定的期限需及时更换。检查设备管路及阀门防止泄漏。检查电器线路连接完好,各开关指示灯显示正常。

年度:原水箱每年拆洗一次,一级RO、二级RO水箱每半年拆洗一次。将水箱连接的管路活节打开,取下水箱后用毛刷刷洗水箱四壁,必要时用消毒液浸泡4~6小时,用大量自来水冲洗水箱,至无泡沫无异味。清洗完毕将水箱安装复位,重新接好液位控制器;再在水箱中放水(原水箱可直接放入自来水,一、二级RO水箱需注入纯化水)至高液位,浸泡约10分钟,排空,重复3次;清洗完毕后可进行下一水箱清洗。
若石英砂过滤器进出水压差明显增加(一般增加>0.05~0.07MPa),反冲洗后产水量及水质明显变差达不到使用要求时,则需更换。活性炭过滤器中的活性炭一般一年更换一次,具体可视设备运行情况作适当调整。

反渗透装置维护:在相同条件下,排除温度影响,出现下列情况,应考虑对反渗透膜进行清洗或更换。
1. 产水电导率比初始或上次清洗后增加10%。
2. 产水量比初始或上次清洗后下降10%。
3. 每年对设备各泵运行进行检修一次,确保无渗漏,无异声。
4. 请专业人员检测EDI装置的工作电压、电流是否正常。


02 空气净化系统
▲ 空气净化系统工作示意图

空调净化系统是厂房达到GMP要求主要设备之一,它是空气通过空调净化系统的过滤、冷却、加热等达到一定温度、湿度、洁净度,送到所需的地方。
如何保持空气净化系统的洁净?保持机组清洁,各部螺栓应紧固。每天耳听有无异常振动和噪音,观察系统有无变化,发现问题及时通知有关人员。空调机每年保养润滑一次,电机每年检修一次。

工艺消毒前的检查:
1. 检查供水、回水阀门是否严密,开关是否灵活;
2. 检查各部位的空气调节阀门有无损坏;
3. 检查空调箱、风管等内部有无锈蚀,脱漆现象;
4. 检查配电盘各种电器接线有无松脱;
5. 检查仪表工作是否正常;
6. 检查风机皮带的松紧度;
7. 检查过滤器有无脱落破损,压框是否变形,螺栓是否松动;
如发现有缺陷或损坏,应立即维修,维修合格后填写记录。

03 生物安全柜
▲ 生物安全柜示意图
每日维护:
用75%的酒精(其他杀菌剂视用户使用的材料而定)彻底对安全柜内部工作区域表面、侧壁、后壁、窗户进行表面净化。不要用含有氯的杀菌剂,因为它可能对安全柜的不锈钢结构造成损坏。也要对紫外灯和电源输出口表面进行清洁。当清洁安全柜内部区域时,操作人员除了手以外,身体的其他任何部位都不能进入安全柜。
检查警报并检测基本气流。

每周维护:
用75%的酒精(其他杀菌剂视使用的材料而定)彻底对排水槽进行清洗。
检查俘获纸孔处的残留物质。

每月维护:
用湿布对安全柜外部表面进行擦拭,尤其是安全柜的前面和上部,把堆积的灰尘打扫干净。
检查所有的维护配件的合理使用情况。
上述每日工作中的条目。

每季维护:
检查安全柜的任何物理异常或故障。检查荧光显像管确保它们工作正常。当不锈钢上表面有难以去除的斑点时,可以使用MEK(Methyl-Ethyl-Ketone),使用MEK后,快速用清水和液体清洁剂冲洗不锈钢板,并且用聚亚安酯布或者海绵进行擦拭,定期清洁不锈钢表面会使之保持表面的光滑美观。

每年维护:
具备资格的认证技术人员对安全柜进行性能认证,更换紫外灯。

04 传递窗
▲ 传递窗示意图

清洁方法:万级洁净区使用的传递窗用清洁布、消毒剂擦拭清除传递窗内壁、各角落顶棚、紫外灯管、传递窗门等处污迹,污垢堆积处用毛刷、消毒剂刷洗清除污垢。使用时紫外灯照射消毒。十万级及大于十万级洁净区传递窗用湿清洁布擦拭清除传递窗内壁各角落、顶棚、紫外灯、传递窗门等处灰尘污迹,污垢堆积处用毛刷、清洁剂刷洗清除污垢,必要时用消毒剂消毒,使用时紫外灯照射消毒。

05 二氧化碳培养箱
▲ 培养箱示意图

箱体和附件清洁/灭菌(每月1次):取出培养物,关闭电源,取出箱内所有附件及增湿盘,用中性洗洁剂清洗并用蒸馏水漂洗所有附件,用无纺布或纸擦干,再用75%的酒精喷洒消毒后擦干。用75%的酒精喷洒消毒培养箱内胆后擦干,确保内胆角落和顶部经过同样处理。
小件物品如螺丝、托盘支架等需用烤箱在180℃消毒,风扇也需要通过浸入酒精或用烤箱在121℃烘烤20min消毒。(注意:有严重污染时执行)
清洁后装回所有附件及增湿盘,增湿盘重新注入蒸馏水,等培养箱无酒精味之后开通电源。

增湿盘换水(2周1次):取出增湿盘,用中性洗洁剂清洗并用蒸馏水漂洗后用无纺布或纸擦干,用75%的酒精喷洒消毒后擦干,将增湿盘放回培养箱并注入蒸馏水同时也可按比例添加(货号:01-867-1B)Aquaguard-2支原体预防试剂(最好预热至37℃)。

06 电动恒温振荡水槽
▲ 电动恒温振荡水槽示意图

水槽内外应经常保持整洁,外壳切忌用有反应的化学溶液擦拭,以免发生化学反应。
仪器如长期不使用,应将工作室水箱中的水排除,用软布擦净并晾干,套好塑料薄膜防尘罩放在干燥室内,以免仪器受潮而影响使用。
仪器不宜在高电压、大电流、强磁场、带腐蚀性气体环境下使用,以免仪器受干扰损坏及发生触电危险,禁止在水槽无水状态使用加热器。

07 倒置显微镜
▲ 倒置显微镜示意图

所有镜头表面必须保持清洁,落在镜头表面的灰尘,可用吸耳球吹去,也可用软毛刷轻轻的掸掉。
不能用有机溶液清擦其它部件表面,特别是塑料零件,可用软布蘸少量中性清洁剂清擦。
在任何情况下操作人员不能用棉团、干布块或干镜头纸擦试镜头表面,否则会刮伤镜头表面,严重损坏镜头,也不要用水擦试镜头,这样会在镜头表面残留一些水迹,因而可能滋生霉菌,严重损坏显微镜。

仪器工作的间歇期间,为了防止灰尘进入镜筒或透镜表面,可将目镜留在镜筒上,或盖上防尘塞,或用防尘罩将仪器罩住。
显微镜尽可能不移动,若需移动应轻拿轻放,避免碰撞。若细胞房有污染时,置物平台用中性清洁剂擦拭,避免交叉污染。
不允许随意拆卸仪器,特别是中间光学系统或重要的机械部件,以免降低仪器的使用性能。

08 紫外线消毒车
▲ 紫外线消毒车示意图

在使用过程中,应保持紫外线灯表面的清洁,一般每两周用酒精棉球擦拭一次,发现灯管表面有灰尘、油污时,应随时擦拭。
用紫外线灯消毒室内空气时,房间内应保持清洁干燥,减少尘埃和水雾,温度低于20℃或高于40℃,相对湿度大于60%时应适当延长照射时间。
用紫外线消毒物品表面时,应使照射表面受到紫外线的直接照射,且应达到足够的照射剂量。
不得使紫外线光源照射到人,以免引起损伤。
在正常使用情况下,紫外线灯管寿命为3000小时以上。

09 高温高压灭菌锅
▲ 高温高压灭菌锅示意图

每次灭菌结束,需对灭菌锅进行清理,去除锅内、滤污网上的污物。
长时间不用了,需将腔室擦洗干净,保持干燥清洁,并将其关闭。
安全阀:安全阀是保证设备在设计压力安全运行的重要部件,每月应反复提拉数次,保证其灵活状态。
管路各滤网应每天清洗,确保畅通。
压力表、测温探头应每年校验一次。
密封圈表面保持清洁,及时消除异物,如有残损应及时更换。
锁紧机构应每月检查一次,有无松动卡住现象,发现及时调整。

10 低温高速离心机
▲ 低温高速离心机示意图

离心盖上不要放置任何物质,每次使用完毕,务必清理内腔和转头。
台式高速离心机如较长时间未使用,在使用前应将离心机盖开启一段时间,干燥内腔。
电机的碳刷在使用3000小时后,应及时更换,以免磨损整流子。
工作台及机壳要经常保持干净,离心机不用时应套上塑料罩,储存在空气干燥无有害气体浸入的室内。
定期用压缩空气(吸尘器)清除位于离心机后部散热片上的灰尘。
台式高速冷冻离心机可用通常的消毒剂消毒。
如发现转头被腐蚀及裂痕,应立即更换。必须定期用专用的油对转子等进行维护,以避免腐蚀。

11 -4℃及-20℃冰箱
▲ 冰箱示意图

冰箱内禁止存放与本实验室无关的物品。放入冰箱内的所有试剂、样品、质控品等必须密封保存。
保持冰箱出水口通畅,非自动除霜冰箱应定期除霜,定期清洁冰箱,清洁时切断电源,用软布蘸水擦拭冰箱内外,必要时可用中性洗涤剂。
若温度超出规定范围,调节温控使其回到正常范围,并进行记录。
若温控调节无效,报请设备科维修,修理后须验收合格并签字后方能正常使用。