细胞培养基础问答

细胞生物学专家2020年2月27日

您有一封感恩节的信,请注意查收

HAPPY THANKSGIVING DAY


……结束了?
当然没有
正餐之后还有甜点~
知识永远都不会迟到
为感谢大家的支持
BI专门为大家总结了系列问题的解决方案
下面跟小编一起进入细胞培养知识小课堂吧~


第一课

欢迎大家来到---细胞培养知识小课堂

       细胞培养实验中用量最多的就是细胞培养基,虽然细胞培养试验基本技术大同小异,但是每种细胞的培养条件却相差甚远。若偏离某种细胞所需的培养条件,则会导致细胞表达不同的表型
因此,在实验前,需要熟悉自己所使用的细胞系,并在实验中严格遵守所有产品的操作说明。
在实验过程中,作为实验小白,我们应该如何应对相关问题呢?
来,大家看黑板啦~

问:首先,我们要如何挑选适合自己细胞生长的培养基呢?
答:选择培养基没有确切的标准,有几点建议可供参考:
       1. 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅ATCC或在购买细胞株时咨询供应商。
       2. 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选RPMI1640。
       3. 其他实验室惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞。
       4. 也可用多种培养基培养细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验室结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。

问:如何正确地保存培养基?
答:普通的培养基放置在2-8℃冰箱避光保存,若已开封建议3周内使用。未开封的培养基,一般可稳定保存1年。

问:培养基中酚红的作用是什么?导致培养基颜色变化的原因有哪些?
答:1. 酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。
       2. 培养基颜色变黄,原因有:培养基中细胞代谢产物为酸性,培养瓶受污染,细菌代谢产酸等导致。
       3. 培养基颜色偏暗红色,原因有:培养基保存在4℃冰箱中,培养基内的二氧化碳逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性,而培养基中的酸碱指示剂酚红会随着碱性增加而更偏暗红。

问:我感觉自己的培养基污染了,这要怎么进行测试呢?
答:取0.1ml液体培养基涂布到无菌蛋白栋牛肉膏培养基上37℃培养24h,观察有无杂菌生长(肉眼即可观察到)。

问:如果我的培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?
答:一旦培养基中添加了血清和抗生素,建议避光保存在4℃冰箱且在2周内用完。因为一些抗生素和血清的基本成分在解冻后就开始降解了。

问:哇!我的培养基怎么有沉淀了,这是怎么回事?怎么预防处理沉淀?
答:1. 首先判断培养基是否已经污染,其次,若沉淀为絮状沉淀则可能是加入血清引起的,此沉淀对细胞培养无影响。若沉淀为结晶,有可能是因为向培养基里加入的辅助试剂降低了培养基的溶解度,使一些无机盐析出。
       2. 可应用离心、过滤的方法去除这些沉淀,尽可能地减少血清冻融次数。

问:那我什么情况下可以使用不加酚红的培养基呢?
答:研究表明,酚红可以模拟固醇类激素(特别是雌激素)的作用。为避免固醇类反应,培养细胞时,用不加酚红的培养基;一些研究人员在做流式细胞检测时,为了避免酚红干扰检测,也使用不加酚红的培养基。

问:为什么培养基中会含有L-谷氨酰胺和丙酮酸钠,它们的作用是什么?
答:L-谷氨酰胺脱掉氨基后可作为培养细胞的能量来源参与蛋白质的合成和核酸代谢。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。