MSC诱导分化与染色实用指南
细胞生物学专家2020年2月20日
间充质干细胞(MSC)具有多向分化的潜能,在体外一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。
BI  NutriStem® MSC系列拥有众多明星产品,除了NutriStem® MSC无血清培养基,也提供MSC诱导分化试剂—MSCgoTM XF Differentiation Kits。

为何选择MSCgoTM XF Differentiation Kits ?
不含血清,无异源,
促进多种来源hMSC分化为
成骨、成脂细胞、成软骨细胞,
分化效果更加明显,
成骨分化可短至7天。

成脂分化 

成骨分化

成软骨分化


如何做好干细胞诱导分化? 
成骨
1. 接种hMSC:用MSC Attachment solution (BI;P/N: 05-752-1,1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘,每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF,接种6x104细胞 (3x104cells/Cm2)。
(注意:若使用其他培养器皿,请适当调整体积。)
2. 置于37°C,5% CO2培养箱中培养。
3. 分化:培养24h后即细胞融合度达到80%时,将MSC NutriStem® XF 培养基吸除,每孔加入0.5ml分化培养基。
(注意:若细胞融合度<80%,继续再培养一天。)
4. 置于37°C,5% CO2培养箱中培养10-21天,每2-3天换液。
(注意:培养时间越长,越容易矿化,ARS染色更明显。)
5. 成骨评价:使用2%的ARS染色液。

成脂
接种hMSC
1. 用MSC Attachment solution (BI;P/N: 05-752-1,1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘,每孔加入0.5ml MSC  NutriStem® XF,接种6x104 细胞 (3x104 cells/cm2)。注意:若使用其他培养器皿,请适当调整体积。
2. 置于37°C,5% CO2培养箱中培养。
分化
1. 培养24h后即细胞融合度达到80-90%时,将MSC NutriStem® XF 培养基吸除,每孔加入0.5ml分化培养基。
注意:若细胞融合度<80%,继续再培养一天。
2. 置于37°C,5%CO2 培养箱中培养14-21天,参照以下建议的替代培养基。
根据hMSC类型的替代培养基方法
不同来源的hMSC具有不同的多向分化潜能。例如,hMSC-AT需要较短的诱导期(~ 6天),而比hMSC-BM和hMSC-CT需要10天诱导期。
注意:对于所有不同类型的hMSC,诱导成脂后建议使用维持培养基。避免将液体直接加入到脂肪细胞上,需要非常小心移液,因为脂肪细胞是脆弱的。
hMSC-AT:
1. 一个分化周期/维持培养基6-8天使用完全成脂分化培养基,建议每3-4天换液。
2. 成脂诱导完成后,用维持培养基MSC  NutriStem® XF(05-200-1,05-201-1 ,BI))替代分化培养基,培养3-4天。
hMSC-BM:
1. 一个分化周期/维持培养基8-12天使用完全成脂分化培养基,建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。
2. 成脂诱导完成后,用维持培养基(MSC  NutriStem® XF (05-200-1,05-201-1 ,BI))替代分化培养基,培养3-4天。
hMSC-CT:
1. 至少两个分化周期/维持培养基5-10天使用完全成脂分化培养基,建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。
2. 成脂诱导完成后,用维持培养基(MSC  NutriStem® XF (05-200-1,05-201-1)替代分化培养基,培养3-6天,每2-4天换液。
3. 重复培养周期直到观测到成熟脂肪细胞(即脂滴的形成)。
成软骨
1. 接种hMSC,3D培养在 96-well U-bottom培养板中每孔加入100μl MSC  NutriStem® XF,接种1x105细胞 (30-40x104 cells/cm2)。无需预包被。
注意:微量培养技术也是一个选择并且可以激发球形细胞的形成:接种10μl 1x104cells/ml 入板的中心(最终1x105cells/well),使其贴壁2小时,然后加入培养基0.1ml/well。
2. 置于37°C,5% CO2培养箱中培养。在24-48小时内会自发形成球状体。
3. 分化:培养24小时后,将MSC  NutriStem® XF培养基吸除,每孔加入0.2ml分化培养基。
4. 置于37°C,5% CO2培养箱中培养14-21天。
注意:培养时间长,将得到更成熟的软骨细胞(Alcian Blue染色强度更大)。
5. 每3-4天更换分化培养基(0.2ml/well)。
注意:小心不要吸入球状体。


如何更好地鉴别MSC分化能力?

ViVaCell提供专为干细胞分化而设计
间充质干细胞分化染色试剂
(MSC Differentiation Staining Kits)
染色能力强,效果更加稳定
从固定~染色~漂洗~拍照,一气呵成
满足了脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞的染色需要

MSC成骨分化染色试剂盒

MSC成脂分化染色试剂盒

MSC成软骨分化染色试剂盒