如何让细胞乖乖沉睡,满血复活?

细胞生物学专家2019年12月19日

养细胞时期的小编,
常常希望自带一股开挂神力,
保护好娇弱的细胞,拯救惨不忍睹的实验!
如同《星球大战》里拥有 ”原力光环“的主角们,
可以隔空移物,手接闪电,最后拯救世界!
小编至今疑惑“原力”到底是什么?
“ I am one with the force ,
and the force is with me.”
翻译过来比较玄,很像中国武侠小说的内力~
“ 我与原力同在,原力与细胞同在
冻存的细胞,满血复活吧! ”



回    到    现    实
经常有用户反映“细胞冻存与复苏遇到了问题”
“如何握住原力,让你的细胞乖乖沉睡又满血复活?”
逍鹏生物的老司机为此做了以下总结:
选 好 细 胞 冻 存 液 是 基 础
使用动物血清常常会遇到很多问题,例如:病毒感染、其他动物源的污染。使用无血清制品培养与冻存细胞,可以消除这方面的隐患。此外,无血清冻存液可以确保细胞在化学成分固定的条件下生长,更进一步确保细胞冻存时的条件稳定。
慢 慢 做 冷 冻
若您养的是贴壁细胞,请先将细胞消化下来;若是悬浮细胞,请直接按以下步骤进行:
1. 以200-300g离心3分钟,弃去上清,收集细胞。
2. 用BI无血清冻存液将细胞重悬(不需回温),将细胞密度调整为3~5x106 cells/ml,添加到冻存管中(一般每管1ml)。
3. 建议将含有细胞悬液的冻存管放进渐进降温盒或是保温杯中,置于-80°C冰箱6小时以上或是过夜(或不需要程序降温)。
4. 将冻存管迅速移到液态氮中保存。
5. 冻存24小时后,建议检测细胞存活率。
细 胞 复 苏 要 迅 速
1. 将细胞冻存管由液态氮中取出,置于室温回温,不用水浴溶解。此时可准备新鲜培养   基、无菌15ml离心管、培养瓶。
2. 在生物安全柜内,直接以少量培养基反复冲融,使细胞团块化冻。
3. 先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基,再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g,3分钟离心收集细胞。
4. 倒去上清液,重悬细胞,移到培养瓶中培养。
BI无血清细胞冻存液
不含动物成份
细胞冻存与复苏后,平均活细胞回收比例超过90%
Serum-Free Cell Freezing Medium
无血清细胞冻存液,货号: 05-065-1A/B

无血清培养的细胞应该使用无血清的冻存液保存,以保持无血清培养体系的完整。本冻存液不含蛋白及动物组分,主要成分为DMSO和甲基纤维素。
Cryostem ACF Freezing Media
无血清干细胞冻存液(Optimized for Stem Cell),货号: 05-710-1B/E

CryoStem对所有种类的细胞都有非常好的冻存效果,该产品经过验证,特别适用于人胚胎干细胞和人原代细胞的冻存。用CryoStem冻存融解后,细胞表现出极佳的复苏率、生长活性、贴壁性和传代能力。

MSC Freezing Medium
无血清间充质干细胞冻存液,货号: 05-712-1B/E

即用型溶液,特别适用于人类间充质干细胞冻存,用MSC冻存液冻存融解后,细胞表现出极佳的复苏率、生长活性。




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