扒一扒细胞的促贴壁物质和包被方法

细胞生物学专家2019年12月12日

许多细胞必须添加促贴壁物质才能贴壁生长,
促贴壁物质一般为细胞外基质,
如纤连蛋白、层粘连蛋白等。
不同细胞外基质对细胞粘附的效果一样吗?
细胞外基质的包被浓度是什么标准?
今天我们就来扒一扒
那些常见的促贴壁物质和包被方法~

胶原蛋白(Collagen)
是支持细胞和组织生长的重要胞外基质蛋白,其形成的胞外环境有利于多种细胞的粘附、生长、迁移和分化。I型胶原可促进正常细胞和转染细胞的贴壁和增殖。胶原主要包括I型胶原,Ⅱ型胶原,Ⅲ型胶原,Ⅳ型胶原,Ⅴ型胶原,Ⅵ型胶原几种。
I型胶原——最常见的胶原蛋白,促进细胞的贴壁和增殖,用于内皮细胞,肝细胞,肌细胞等的培养。
软骨细胞对II型胶原的黏附性较好;上皮细胞在Ⅳ型胶原底物上贴壁良好,而在I、II、III型胶原底物的培养板上贴壁情况较差。
胶原应用及建议细胞基质浓度:
纤粘连蛋白(Fibronectin,FN)
一种位于细胞表面和血浆中的大分子蛋白质,是一种主要的细胞黏附分子,在细胞纤维基质中发挥结构和黏附性作用。
建议以1-5ug/cm2或者 0.5-50ug/ml的浓度作为细胞基质,但最佳浓度取决于细胞类型或研究目的、应用方向。
BI也提供Fibronectin solution(货号: 03-090-1),可参考如下方法包被:
(1) 19ml 无菌的PBS加1ml的纤连蛋白 (浓度50ug/ml);
(2) 之后一个T25 (表面积25 cm2)需用2.5ml包被, 所以视使用情形分装包被;
(3) 一个T25加2.5ml纤连蛋白溶液;
(4) 放4度至少30分钟;
(5) 吸出纤连蛋白溶液;
(6) 用无菌的PBS润洗一次, 即可培养细胞。

层粘连蛋白(Laminin)
是细胞外基质的重要组成,存在于所有上皮细胞和内皮细胞的基底侧,同时也是某些细胞与细胞间交互作用的中间媒介。层粘连蛋白有细胞及组织特异性,对于调节细胞功能具有重要作用,如:协助粘附、促进生长、引导迁移、调控分化、维持表型、防止细胞凋亡等。
在哺乳动物胚胎中,Laminin-521和511是最早表达的胞外蛋白,在2-4细胞期,已经可以检测到。LN-111支持hPSCs高效,符合GMP标准地分化为均一的多巴胺(DA)前体细胞。相比拟胚体(EB)为基础的实验方案,DA前体细胞的产量在LN-111上增加40倍以上。
层粘连蛋白,根据不同细胞系,包被浓度一般为5-20μg/ml。
BioLamina人类重组层粘连蛋白:
化学成分限定,无异源动物成分。
使用1×DPBS(Ca2+/Mg2+)稀释,并将包被溶液加入到培养皿中,确保包被溶液覆盖整个培养皿表面,2-8℃孵育过夜或37℃孵育2小时。

玻璃粘连蛋白(Vitronectin)
属于小分子蛋白,借由Vitronectin 受体让细胞贴附于细胞基质中,主要促进细胞迁移,增加细胞贴附性、细胞分裂、细胞生长分化等,并协助细胞间的讯号传递。
BI重组玻璃粘连蛋白 Vitronectin ACF Human Recombinant  200 µg(05-754-0002)
使用浓度0.5mg/ml,预包被浓度:0.5µg/cm2
建议按如下浓度包被,适用于培养hPSC:
1.在冰上解冻重组玻连蛋白。
2.加入3ml /孔(6孔盘)NutriStem® V9 XF 培养基。
3.在37℃的CO2培养箱中放置至少30分钟。
4.加入5-7.5µl玻连蛋白ACF到3ml NutriStem® V9 XF培养基中并旋转。注意:也可以在NutriStem®V9 XF培养基中直接添加玻连蛋白ACF(浓度:0.25-0.375µg/cm2)。

MSC 促贴壁试剂
MSC促贴壁试剂是Biological industries产品,搭配MSC NutriStem XF Medium使用,效果更佳。MSC促贴壁试剂针对多种来源的hMSC(骨髓,脂肪组织和脐带)特别开发。
特点:
• 无异源体系
• 适用于多种来源的MSC细胞贴壁
• 即用型,100倍浓缩液
• 适用于无血清体系
• 适用hMSC增殖和诱导分化试剂
可参考如下包被方法:
1.使用DPBS溶液,将MSC贴壁试剂稀释100倍(1:100)。
2.加入适量的1XMSC贴壁试剂涂层培养皿或板;包被期间, 注意包被液不可以干掉!
3.轻轻摇动培养皿,确认贴壁试剂均匀分布在培养皿表面后,用封口膜包裹涂层的培养皿。
4.在2-8℃孵育过夜;或者在CO2培养箱,37℃,至少孵育30分钟。
5.接种前, 吸除贴壁试剂,再用DPBS轻轻冲洗培养皿,即可接种细胞。


使用MSC Attachment solution后,MSC贴壁效果: