手把手教您给细胞化个妆

细胞生物学专家2019年12月12日

细胞凋亡、细胞计数都会用到细胞染色
今天我们就聊聊:
新手入门
如何轻松搞定细胞染色,
给你的细胞一个精致瑞丽的妆容?
细胞骨架的荧光染色
台 盼 蓝 染 色
台盼蓝染色是细胞培养常见的实验,用于细胞计数,检测细胞活性。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色。


小鼠胚胎干细胞台盼蓝染色

三步轻松搞定台盼蓝染色:
1、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释(106 细胞/ml)。
2、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
3、计数:在三分钟内,用计数板分别计数活细胞和死细胞 。

台盼蓝染色看起来so easy,但新手入门还是需要注意:
1、染色时间不能太长,否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使检测结果偏离。
2、可结合细胞计数方法,同时进行细胞计数和活力检测。
3、有潜在致癌危险,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

BI台盼蓝染液

细胞免疫荧光染色
荧光显微镜技术,不仅用于研究蛋白结构,对细胞凋亡检测也具有重要意义。常用的包括:Hoechst、碘化丙啶(Propidium-Iodide,PI)、annexin-v、JC-1、钙黄绿素-AM等方法。

hoechst染色,紫外光下核染为蓝色

 
hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合,有hoechest33342和hoechst33258两种,区别不大。但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些,所以一般hoechsts33258用于细胞固定后再染色,而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色!

PI单一染色观测培养细胞,只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡(当然晚期凋亡PI亦可着色)。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况,而不是仔细区分坏死或凋亡,那么PI单一染色也可以。

JC-1染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1~5mg/ml),储存于-20℃,用时以培养液稀释至10ug/ml 终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液,漂洗细胞后直接加入染色液,10~30 min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测,收集红/绿信号强度,计算其强度比。
总结